原代細胞培養(yǎng)是細胞實驗中較為重要的一環(huán)，同時該實驗也具有一定的難度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”，今天我們就來一起總結(jié)一下，原代細胞培養(yǎng)，都有哪些注意事項。

常見的原代細胞類型

上皮細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、角質(zhì)形成細胞、黑色素細胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞、干細胞。

原代細胞的優(yōu)缺點

 

原代細胞VS細胞系

能夠培養(yǎng)的細胞系，已經(jīng)獲得了通過隨機突變或通過修飾（例如癌癥基因的人工表達）轉(zhuǎn)化的癌細胞系中的無限增殖（永生化）的能力。連續(xù)細胞系通常比原代細胞更堅固，更易于操作。它們具有無限的增長潛力，是獲取基本信息的快速簡便方法。使用連續(xù)細胞系的一些缺點是它們是經(jīng)過基因修飾/轉(zhuǎn)化的，可以改變生理特性并且不代表體內(nèi)狀態(tài)，并且隨著時間的流逝，這可能會進一步改變。

而原代培養(yǎng)得來的細胞不具備無限分裂的能力，但可以相對更好地還原生物體內(nèi)細胞生長狀況。

 

倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？

倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在的錯誤

污染：轉(zhuǎn)移主要組織進行培養(yǎng)時需要注意避免污染。

pH值變化：這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確，細菌或真菌污染，碳酸氫鹽緩沖液不足，二氧化碳張力不正確等引起的。

粘附性不足（細胞不貼壁）：培養(yǎng)基中不含附著因子（attachment factors）或附著因子不足，培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染，細胞被胰蛋白酶過度消化等。

生長緩慢：原因包括培養(yǎng)基的pH值變化，必需的促進生長的成分/因子耗盡，低污染，試劑儲藏不當?shù)取?/span>

細胞死亡：溫度波動，二氧化碳含量過低，在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損，有毒代謝產(chǎn)物濃度增加，培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導(dǎo)致細胞存活率降低。

沉淀（pH不變）：由于使用了冷凍培養(yǎng)基，在pH不變的培養(yǎng)基中可能會出現(xiàn)沉淀，殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。

細胞結(jié)塊（細胞不貼壁且結(jié)塊）：懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在或細胞裂解及DNA釋放（過度用蛋白水解酶消化）而結(jié)塊。

誘導(dǎo)變異性：多種試劑和培養(yǎng)基會誘導(dǎo)原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異，研究者的處理手法也可能導(dǎo)致原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

• 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

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