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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)簡述

更新時間:2022-05-24  |  點擊率:637

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細(xì)胞在體外條件下的生長,在培養(yǎng)的過程中細(xì)胞不再形成組織(動物)。

培養(yǎng)物是單個細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中,由于環(huán)境的改變,細(xì)胞的移動或受一些其他因素的影響,培養(yǎng)時間加長,傳代導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)單一化型。

優(yōu)點

1.直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生命活動。用于細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、實驗醫(yī)學(xué)和腫瘤學(xué)等多種學(xué)科研究.

2.直接觀察細(xì)胞的變化可便于攝影。

3.研究細(xì)胞種類如低等到高等到人類、胚胎到成體、正常組織到腫瘤。

4.便于使用各種技術(shù):相差、熒光、電鏡、組化、同位素標(biāo)記等方法觀察和研究細(xì)胞狀況。

5.是分子生物學(xué)和基因工程學(xué)的研究對象,也是其主要的組成部分。

6.易于施用物理、化學(xué)生物的實驗研究。

7.易于提供大量生物性狀相似的實驗對象,耗資少比較經(jīng)濟(jì)。

8.成為生物制品單克隆抗體生產(chǎn)和基因工程等的材料來源。

缺點

組織和細(xì)胞離體后獨立生存在人工的培養(yǎng)環(huán)境中,雖然模擬體內(nèi)環(huán)境,仍有很大差異。 因而利用培養(yǎng)細(xì)胞做實驗時,不應(yīng)視為體內(nèi)細(xì)胞*相同,把實驗結(jié)果推測體內(nèi),輕易做出與體內(nèi)等同的結(jié)論。

細(xì)胞類型根據(jù)是否附于支持物上生長的特性,分為 貼附型、懸浮型。

貼附型

細(xì)胞貼附在支持物表面生長,只依賴貼附才能生長的細(xì)胞叫做貼附型細(xì)胞(Anchorrage-dependent cells)這種現(xiàn)象與細(xì)胞分化有關(guān)。

貼附型細(xì)胞的分型

1.成纖維型細(xì)胞:(fibroblast) 來自中胚層

特點:與體內(nèi)成纖維細(xì)胞形態(tài)相似,胞體梭型或不規(guī)則三角形,中央有圓形核,胞質(zhì)向外伸出2~3個長短不同的突起。細(xì)胞在生長時呈放射狀,漩渦或火焰狀走行。

起源:細(xì)胞來自中胚層間充質(zhì)組織。

除真正的成纖維細(xì)胞、心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞。

注意:細(xì)胞在培養(yǎng)時成為成纖維型細(xì)胞是一種慣稱,與體內(nèi)細(xì)胞不同。

2.上皮型細(xì)胞(epithlium cell type) 來自外胚層。

特點:扁平不規(guī)則多角型、圓形核、細(xì)胞緊密相連成細(xì)胞增殖數(shù)目增多時,整個上皮膜隨之移動。邊緣細(xì)胞很少脫離細(xì)胞群而單獨活動“ 拉網(wǎng)"現(xiàn)象與起源內(nèi)外胚層組織有關(guān)。

組織: 皮膚表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。

3. 游走型細(xì)胞(wandering cell type)

特點:在支持物上散在生長,不連接成片,胞質(zhì)伸出偽足或突起呈活躍的游走或變形運動,速度快不規(guī)則, 密度大連接成片呈多角形不易與其他類型的細(xì)胞 區(qū)別。

4. 多形型細(xì)胞(polymorphic cell type)

特點: 無規(guī)律的形態(tài),如神經(jīng)細(xì)胞。

懸浮型

特點: 不貼附在支持物生長,胞體圓形,在培養(yǎng)液中生長空間大,可長時間的生長,繁殖旺盛便于做細(xì)胞代謝研究。S180肉瘤、血液里的白細(xì)胞、K562、 HL-60。

分型的目的:

方便描述細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的形態(tài)變化。培養(yǎng)條件好時,細(xì)胞相對穩(wěn)定,可反映出起源、正常異常的區(qū)別,作為判定細(xì)胞生物學(xué)性狀指標(biāo)。

強(qiáng)調(diào):一般形態(tài)并不是一項可靠指標(biāo)要受各方面影響。

如:反復(fù)開關(guān)溫箱、溫度、C02的濃度、培養(yǎng)基變堿、支原體、pH值。細(xì)胞在接種時呈三角型狀態(tài),經(jīng)培養(yǎng)一定時間后,細(xì)胞在傳代前已形成上皮型細(xì)胞。

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