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細(xì)胞培養(yǎng)之:如何從血清檢測(cè)指標(biāo)評(píng)價(jià)優(yōu)質(zhì)血清

更新時(shí)間:2022-07-08  |  點(diǎn)擊率:916

牛血清是目前細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的、細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成分,具有極為重要的功能。

要保證血清質(zhì)量,需要有嚴(yán)格的質(zhì)控,包括從外觀到理化性質(zhì)、細(xì)胞增殖試驗(yàn)和微生物檢查,制定一系列的標(biāo)準(zhǔn),以及出廠產(chǎn)品能符合這些標(biāo)準(zhǔn)。

一、外觀及相關(guān)物質(zhì)含量

 


以胎牛血清為例,優(yōu)質(zhì)的特級(jí)胎牛血清,外觀應(yīng)是淡棕色至橙色透明液體,無(wú)顆粒物沉淀。

PH在6.7-8.2之間;

滲透壓在260-340mosm/kg之間;

血紅蛋白含量小于20mg/dL;

總蛋白含量在30-50g/L;

白蛋白含量在14-34g/L;

α、β、γ球蛋白含量則以實(shí)際測(cè)量為準(zhǔn);

IgG應(yīng)小于250μg/mL;

內(nèi)毒素含量應(yīng)小于3EU/mL;

內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對(duì)細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代


二、無(wú)菌檢測(cè)

 

優(yōu)質(zhì)的特級(jí)胎牛血清還要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè)。確保血清無(wú)污染。

檢測(cè)項(xiàng)目包括厭氧菌、好氧菌、真菌(最容易污染細(xì)胞的酵母菌和霉菌都應(yīng)包括在內(nèi))以及支原體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)全部為陰性,視為通過(guò)無(wú)菌檢測(cè)。



三、病毒檢測(cè)

 

血清含有bing毒,會(huì)導(dǎo)致宿主細(xì)胞發(fā)生腫脹、壞死、脫壁,不僅嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度,更可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成威脅。

對(duì)于血清中的病毒檢測(cè),重點(diǎn)放在那些曾世界大范圍爆發(fā)、人畜共患或是十分常見(jiàn)的病毒身上。

每個(gè)地區(qū)的法規(guī)會(huì)有些許區(qū)別,但牛副流感3型病毒(PI-3)、牛腹瀉病毒(BVD)、牛細(xì)小病毒等是任何國(guó)家和地區(qū)的檢測(cè)報(bào)告中,都應(yīng)標(biāo)注清楚的。

一批合格的血清,所有bing毒檢測(cè)項(xiàng)目均應(yīng)為陰性。



四、細(xì)胞生長(zhǎng)情況

 

促進(jìn)細(xì)胞增殖方面,也是血清一項(xiàng)不可忽視的指標(biāo)。每一批次血清也應(yīng)就克隆率、細(xì)胞毒性、細(xì)胞增殖密度、和倍增時(shí)間進(jìn)行檢查。

所有檢測(cè)結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)范。



五、抗體檢測(cè)

 

病毒檢測(cè)反映的是動(dòng)物采血時(shí)、或血清加工過(guò)程中有沒(méi)有感染病毒,而抗體檢測(cè)則表示該供體動(dòng)物在采血前一段時(shí)間內(nèi),是否感染過(guò)病毒。

優(yōu)質(zhì)的特級(jí)胎牛血清,應(yīng)保證動(dòng)物從始至終都沒(méi)有感染過(guò)相關(guān)病毒,因此檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。

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