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如何檢查胎牛血清中的病毒

更新時(shí)間:2020-11-18  |  點(diǎn)擊率:797

胎牛血清作為天然培養(yǎng)基被實(shí)驗(yàn)室和科研單位廣泛使用,它富含細(xì)胞生長(zhǎng)中的各種營(yíng)養(yǎng)成分,但是也容易受到病毒感染,從而給細(xì)胞培養(yǎng)帶來(lái)潛在的干擾。

在美國(guó),胎牛血清的病毒檢查遵循著9 CFR 113.52 、9 CFR 113.53聯(lián)邦法令,并以獸藥委員會(huì)(CVMP)關(guān)于免疫性獸藥生產(chǎn)中應(yīng)用牛血清的指南文件(EMEA/CVMP/743/00-Rev.2)、專li藥委員會(huì)(CPMP)關(guān)于生物藥生產(chǎn)中牛血清應(yīng)用指南的文件(EMEA/CPMP/BWP/1793/02)為參考,并在美國(guó)藥典(USP)中有所描述。而我國(guó)在藥典中目前只有有關(guān)新生牛血清的質(zhì)檢規(guī)定,還沒(méi)有胎牛血清的內(nèi)容。

USP提到病毒檢查中,建議使用兩種或兩種以上的細(xì)胞系作為檢測(cè)細(xì)胞,其中一種細(xì)胞系應(yīng)為牛源。檢測(cè)時(shí),添加15%的待測(cè)牛血清培養(yǎng)細(xì)胞至少21天,期間細(xì)胞至少傳代兩次。之后觀察是否存在病毒的擴(kuò)增。如用顯微鏡觀察是否存在細(xì)胞病變效應(yīng)(例如由牛鼻支氣管炎病毒導(dǎo)致)、細(xì)胞染色和鏡下包涵體檢查、血吸附檢查((牛副流感3型病毒),并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行針對(duì)如下病毒的特異性的免疫熒光抗體檢查:

牛病毒性腹瀉病毒(BVDV

牛細(xì)小病毒

牛腺病毒

牛蘭舌病毒

牛呼吸道合胞病毒

呼腸弧病毒

狂犬病病毒

病毒還可以在電鏡下觀察,更直觀,更全面。但電鏡需要相應(yīng)的儀器,樣本也需要一定的制備過(guò)程。

chang用的病毒檢查方法還是免疫檢查(這個(gè)特異性gao)、血吸附檢查和細(xì)胞病變效應(yīng)。后兩個(gè)檢查是通用的病毒檢查,不具有病毒特異性,且二者可以互補(bǔ)。一些病毒為血吸附病毒,含有血凝素(HA),可以引起紅細(xì)胞的聚集;另外一些病毒則可造成細(xì)胞變性,引起受染細(xì)胞發(fā)生聚集、脫落、融合,形成包涵體,甚至損傷、死亡。這些恃征性的改變,稱為細(xì)胞病變效應(yīng),它可在低倍顯微鏡下直接觀察。

許多胎牛血清在質(zhì)控證書(shū)上都會(huì)注明檢查的病毒種類和結(jié)果。如Ausbian®特級(jí)胎牛血清在COA即會(huì)注明廠家開(kāi)展的這些檢測(cè)。

 

總之,確定牛血清沒(méi)有病毒感染,無(wú)論對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng),還是疫苗生產(chǎn),都具有非常重要的意義。

 

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